Культивирование макромицетов

Для изучения биологии грибов и продуктов их жизнедеятельности часто возникает необходимость получить культуру макромицетов в лаборатории. В настоящее время методом культивирования широко пользуются при исследовании физиологии и биохимического состава грибов, способности их к биосинтезу или к разложению органического вещества, при изучении микоризы и для других целей.

Культивирование грибов требует специально оборудованной лаборатории, где можно производить посев, стерилизовать и мыть посуду, готовить среду. Грибы выращивают в чашках Петри и биологических пробирках, в колбах Эрленмейера, на жидких или плотных питательных средах. Для приготовления сред используют природные питательные субстраты в естественном виде (опилки, веточки, куски древесины и т. п.) или их экстракты, отвары (пивное сусло, грибной или картофельный отвар, отвары хвои, листьев и пр.). Применяют также целый ряд сложных искусственных сред различного состава.

Если возникла необходимость получить культуру - работу начинайте с подготовки посуды и среды. Чисто вымытую и высушенную посуду заверните в бумагу; колбы и пробирки заткните ватно-марлевыми пробками, горлышки обвяжите бумажными колпачками. Стерилизуйте посуду в автоклаве 15-20 мин при 1 атм или в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 2 ч.

Приготовьте среду; для этого используйте любой из следующих составов.

1. Сусло-агар: 200 мл неохмеленного пивного сусла разведите в 400 мл воды; 20 г агар-агара расплавьте в 400 мл воды, слегка охладите и смешайте с растворенным суслом.

2. Картофельно-глюкозный агар: 200 г очищенного и нарезанного картофеля кипятите в 500 мл воды в течение 2 ч; расплавьте 17 г агар-агара в 500 мл воды; отвар картофеля процедите в агар и добавьте 20 г глюкозы.

3. Овсяный агар: 75 г овсяной муки медленно нагревайте в течение часа в 500 мл воды на водяной бане; 17 г агар-агара расплавьте в 500 мл воды и смешайте с процеженным овсяным отваром.

4. Среда Чапека: в 500 мл дистиллированной воды растворите 2 г NaN0₃, 1 г К₂НР0₄, 0,5 г MgS0₄·7H₂0, 0,5 г KCl, 0,01 г FeS0₄х7H20 и 30 г сахарозы; в 500 мл дистиллированной воды расплавьте 20 г агар-агара и соедините его с раствором солей.

Готовую среду простерилизуйте в автоклаве при 1 атм в течение 15-20 мин. Прежде чем это сделать, универсальной лакмусовой бумагой проверьте реакцию среды. Оптимальное значение рН равно 6,0; если имеются отклонения - подкислите среду 6н. кислотой (НСl) или подщелочите 6н. щелочью (NaOH), добавляя кислоту или щелочь мелкими каплями под контролем.

После стерилизации среду слегка охладите, разлейте в стерильные пробирки (на "косяк") и в чашки Петри. Для того чтобы при посеве не произошло бактериального заражения, добавьте в среду антибиотики из расчета 200 ЕД пенициллина, 100 ЕД стрептомицина, 25-50 ЕД тетрациклина на 1 мл среды.

Культуру базидиальных макромицетов лучше выделять из плодовых тел или спор.

Для получения тканевой культуры пользуйтесь молодыми, неповрежденными плодовыми телами, очищенными от мусора, хорошо промытыми и высушенными. Плодовое тело разломите; из разных его частей стерильным скальпелем возьмите несколько кусочков ткани (примерно по 0,5х0,5 см), поместите их на среду в чашки Петри. Чашки поставьте в термостат при температуре 20-25°С. Чтобы обеспечить высокую относительную влажность (80%), обклейте чашки изоляционной лентой или поставьте рядом с ними сосуд с водой.

Чтобы получить споровую культуру, в качестве посевного материала используйте порошок спор, взвешенный в воде в виде суспензии. Споровый порошок выделите из шляпки, приклеенной к крышке пустой стерильной чашки Петри.

Коллекцию культур храните при комнатной температуре или в холодильнике. Время от времени пересевайте культуры на свежую питательную среду по мере расходования прежней.